基因组DNA提取试剂盒

产品货号：

GS2267

中文名称：

基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Genomic DNA Mini-Preps Kit

产品规格：

50T|100T|250T

发货周期：

1～3天

产品价格：

询价

本试剂盒可从新鲜、冷冻或石蜡包埋的动物组织、细胞、血液或细菌中快速纯化出基因组DNA (但其他形式的DNA，比如线粒体DNA也会一起被纯化出来)。

样品首先在优化过的缓冲液中被proteinase K裂解。然后将溶解产物加入到SD-10吸附柱，DNA会被选择性地吸附到柱子内嵌的吸附膜上。洗涤步骤中，蛋白和其他杂质会被去除，DNA则在低盐缓冲液中被洗脱出来。纯化的DNA A260/A280通常为1.7～1.9，非常适合用于后续实验，比如PCR、Southern blotting，RAPD和RFLP等

纯化过程无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀，操作简单。样品准备好后整个操作过程仅需20min即可完成。不同样品的DNA得率不同，这取决于组织样品的数量和类型，对于大多数组织样品，从25mg样品中可获得5～15μg DNA。

纯化出的DNA OD260/OD280通常为1.7～1.9。
纯化出的基因组DNA质量高，分子量≥20kb。
采用柱式核酸纯化技术，操作简单快速。
产物可用于许多下游应用，比如PCR，限制性酶切和杂交。
无需苯酚/氯仿抽提或乙醇沉淀。
得率高，重复性好。
适用于各种不同来源的样品。

组分	50T	100T	250T
Buffer ACL	10mL	20mL	50mL
Buffer CL	12mL	24mL	60mL
CW1 Solution(浓缩液)	13mL	26mL	65mL
CW2 Solution(浓缩液)	9mL	18mL	45mL
CE Buffer (pH9.0)	15mL	30mL	2×30mL
Proteinase K	1.25mL	2×1.25mL	5×1.25mL
SD-10吸附柱(含2mL收集管)	50	100套	250套

保存：室温干燥，有效期1年，其中Proteinase K置于2～8℃保存。

注意事项

Buffer ACL和Buffer CL保存过程中可能会形成沉淀，使用前加热至56℃使沉淀溶解。
提供的CW1 solution和CW2 solution为浓缩液。使用前，加入指定量的乙醇(96～100%)配成工作液。

样品	用量	得率(μg)
动物组织	25mg	5～15
细胞	1～3×10⁷	15～25
血液	50～100μL	1～3
细菌	1mL	7～15

离心速度至少达到12000×g的小型离心机
移液枪和枪头
涡旋混合器
乙醇(96～100%)
RNase A (10mg/mL，选做，用于获得RNA-free的DNA)
离心管(1.5mL或2mL)
水浴锅，使用前将水浴锅预热至56℃。

本试剂盒可从新鲜、冷冻或石蜡包埋的动物组织、细胞、血液或细菌中快速纯化出总DNA。所有离心步骤均在室温条件(15～25℃)下及离心管中进行。实验开始前请详细阅读说明书。本试剂盒方法简单、快速、可靠，步骤紧凑。实验开始前，请根据下表准备好所有试剂及所需材料。

提供的Proteinase K为即用型的溶液，但是本试剂盒不提供RNase A。如果需要制备无RNA污染的DNA，请准备好RNase A溶液，并根据说明书增加去除RNA的步骤。

使用前检查Buffer ACL和Buffer CL是否出现沉淀。如果有，将溶液加热至56℃重新溶解沉淀。

CE Buffer为10mM Tris-HCl，0.5mM EDTA，pH9.0。后续实验中如果要避免使用EDTA，可用水作为洗脱液，但是不推荐使用pH小于7.0的水。

提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。第一次使用前，分别向13mL/26mL/65mL CW1 Solution加入17mL/34mL/85mL乙醇；向9mL/18mL/45mL CW2 Solution加入21mL/42mL/105mL乙醇。

	50次	100次	250次
CW1 Solution	13mL	26mL	65mL
乙醇(96～100%)	17mL	34mL	85mL
CW1最终体积	30mL	60mL	150mL

	50次	100次	250次
CW2 Solution	9mL	18mL	45mL
乙醇(96～100%)	21mL	42mL	105mL
CW2最终体积	30mL	60mL	150mL

样品采集和保存：
使用新鲜样品可获得最好的结果。如果样品使用前需要保存，将样品立即冷冻并置于-20℃或-80℃长期保存。避免反复冻融，防止DNA降解。
采集的血液中加入EDTA或ACD等抗凝剂，防止血液形成血块。但不推荐使用肝素，因为提取过程中肝素可能会结合到DNA上，并抑制PCR反应。
Proteinase K溶液消化后，组织样品可在Buffer ACL中室温保存6个月，对DNA质量无影响。
样品使用量：
基因组DNA得率和质量取决于样品使用量。不可超过裂解液裂解能力及吸附膜的吸附能力。根据下表使用适量的样品：

样品	用量
肌肉	30mg
肝或脑	20mg
肾或脾	10mg
哺乳动物血液	100μL
鸟类或鱼类血液(含有核红细胞)	10μL
小鼠尾巴	1.2cm
大鼠尾巴	0.6cm
培养的细胞	5×10⁶
细菌	2×10⁹

一、新鲜或冻存的动物组织

实验准备：
- Buffer ACL和Buffer CL储存过程中可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前将溶液加热至56℃溶解沉淀。
- 提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入了乙醇。
- 水浴锅56℃预热。
抽提步骤
- 将25mg组织切成小块，液氮中研磨，将粉末转移至1.5mL离心管中，并加入180μL Buffer ACL，混合均匀。
  - 不要使用超过30mg的组织样品，过量的样品将导致得率降低。
  - 冻存的组织样品应避免反复冻融，以免导致DNA的降解。
  - 对于啮齿类动物的尾巴，大鼠取0.4~0.6cm，小鼠取1.0~1.2cm。
  - 细胞含量高的组织，比如脾，不要使用超过10mg的样品。
- 加入20μL proteinase K。涡旋充分混匀，56℃水浴直到组织完全裂解。
  - 水浴过程间歇混匀促进样品裂解。
  - 裂解时间因组织类型而异，通常为1~3h，也可裂解过夜。
  - 水浴后，裂解产物可能会粘稠，但不应该是胶状的，因为这样会堵塞SD-10吸附柱。如果裂解液为明显胶状，则应延长裂解时间。
  - 如果需要RNA-free的基因组DNA，则加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤3。
- 涡旋混匀15 s。加入200μL Buffer CL到样品中，涡旋充分混匀。
- 加入200μL乙醇(96～100%)，再次充分混匀。
- 将步骤4中的混合液(包括全部沉淀)加入到放置在2mL收集管的SD-10吸附柱。9000×g(12000rpm)离心1min。倒掉收集管中的液体。
- 加入500μL CW1 Solution，9000×g(12000rpm)离心1min。倒掉收集管中的液体。
  - 检查CW1 Solution是否已加入乙醇。
- 加入500μL CW2 Solution，9000×g(12000rpm)离心1min。倒掉收集管中的液体。
  - 检查CW2 Solution是否已加入乙醇。
- 将空吸附柱放回离心管中，9000×g(12000rpm)离心2min，使吸附膜干燥。将吸附柱放入一个干净的1.5mL离心管中。吸附柱开盖，室温静置2～3min，直至乙醇完全挥发。
  - 将SD-10吸附柱内的吸附膜干燥是必要的，因为残留的乙醇会影响后续反应。这一步骤的离心确保接下来的洗脱过程不会带入残留的乙醇。
- 直接向吸附膜中央加入50～100μL Buffer CE。室温静置2min，9000×g(12000rpm)离心2min以洗脱DNA。
  - 将CE Buffer加热至60℃可提高洗脱效率。
  - 使用超过100μL (比如200μL)的洗脱液可提高DNA得率，但浓度会降低。
  - 为获得最高的DNA得率，根据步骤9再次洗脱。
  - 第二次洗脱时使用新的离心管，以免第一次洗脱出的DNA浓度降低。
  - 为获得最高的DNA浓度，将离心管中洗脱出的溶液用于第二次洗脱。

二、培养的细胞

用户自备材料
准备PBS溶液：150mM氯化钠，50mM磷酸钾，pH=7.2。
细胞基因组DNA提取不需要用到本试剂盒中的Buffer ACL。
实验准备
- Buffer CL储存过程中可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前将溶液加热至56℃溶解沉淀。
- 提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入了乙醇。
- 水浴锅56℃预热
抽提步骤
- 样品准备(培养的细胞)
  a.悬浮培养细胞：将适当数量的细胞室温3000×g离心5min(最多1×10⁶个细胞)。小心吸走上清。加入200μL PBS Solution，200μL Buffer CL和20μL proteinase K。涡旋充分混匀。
  b.贴壁培养细胞：吸走培养基，每10cm2细胞加入200μL PBS Solution，200μL Buffer CL和20μL proteinase K。充分混匀。
  - 如果不能立即提取样品基因组DNA，建议-80℃长期保存。
  - 保存的样品避免反复冻融，防止DNA降解。
- 56℃水浴10min，直到细胞完全裂解。
  - 水浴过程间歇混匀，促进细胞裂解。
  - 如果需要RNA-free的基因组DNA，加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤3。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤4-9操作。

三、新鲜或冻存的抗凝血

用户自备材料(血液)
准备PBS溶液：150mM氯化钠，50mM磷酸钾，pH=7.2。
血液基因组DNA提取不需要用到本试剂盒中的Buffer ACL。
实验准备
- Buffer CL在保存过程可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前加热至56℃溶解。
- 提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入乙醇。
- 水浴锅56℃预热。
抽提步骤
- 样品准备
  - 无核的：吸20μL proteinase K到1.5mL或2mL离心管中。加入50～100μL抗凝血液。用PBS溶液调整体积到220μL。进行步骤2。
  - 有核的：吸20μL proteinase K到1.5mL或2mL离心管中。加入5～10μL抗凝血液。用PBS溶液调整体积到220μL。
    进行步骤2。
  - 如果样品不能立即用于基因组DNA的抽提，建议在-80℃长期保存。
  - 保存的样品避免反复冻融，防止DNA的降解。
- 加入200μL Buffer CL到样品中，涡旋充分混匀。56℃水浴10min。
  - 水浴过程间歇混匀，促进样品的裂解。
  - 如果需要RNA-free的基因组DNA，加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤3。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤4-9操作。

四、包埋或固定的样品

用户自备材料(石蜡包埋或福尔马林固定的样品)
- 二甲苯(石蜡包埋的动物组织)
- 准备PBS溶液：150mM氯化钠，50mM磷酸钾，pH=7.2(福尔马林固定的动物组织)。
- 固定的组织中纯化出来的DNA长度通常<650bp，大小取决于样品的类型和年龄以及固定剂的质量。
- 推荐使用酒精、福尔马林等固定剂。不推荐使用可形成交联的固定剂，如饿酸等，因为用这些试剂固定的样品，难以获得扩增的DNA。
- 样品之间裂解时间各不相同，这取决于样品的处理方式。
- 得率取决于样品的大小和年龄。相对于新鲜或冻存的样品，得率通常会降低。
实验准备
- Buffer ACL和Buffer CL在保存过程可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前加热至56℃溶解。
- 提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入乙醇。
- 水浴锅56℃预热。
抽提步骤(石蜡包埋样品)
- 将一小块(不超过25mg)石蜡包埋的样品放入2mL离心管中(未提供)。
- 加入1200μL二甲苯，剧烈涡旋。
- 室温(15～25℃)最大速度离心5min。
- 用移液枪吸走上清，勿吸到沉淀。
- 向沉淀加入1200μL乙醇(96～100%)以除去残留的二甲苯，涡旋轻轻混匀。
- 室温(15～25℃)最大速度离心5min。
- 用移液枪吸走乙醇，勿吸到沉淀。
- 重复步骤5-7一次。
- 离心管开盖后37℃烘10～15min，直到乙醇挥发完全。
- 在180μL Buffer ACL和20μL proteinase K中用研钵研磨组织沉淀。涡旋混合均匀，56℃水浴直到组织完全裂解。
  - 水浴过程间歇混匀，促进样品的裂解。
  - 如果需要RNA-free的基因组DNA，加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤11。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤3-9操作。
抽提步骤(福尔马林固定的样品)
- 将一小块(不超过25mg)福尔马林固定的样品放入1.5mL离心管中。
- 用PBS溶液清洗样品以除去福尔马林。
- 重复步骤2一次。
- 在180μL Buffer ACL和20μL proteinase K中用研钵研磨组织沉淀。涡旋混合均匀，56℃水浴直到组织完全裂解。
  - 水浴过程间歇混匀，促进样品的裂解。
  - 如果需要RNA-free的基因组DNA，加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤5。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤3-9操作。

五、革兰氏阴性或阳性细菌

用户自备材料(细菌)
革兰氏阳性细菌裂解前应当用酶去除细胞壁(比如溶菌酶)，但是本试剂盒不提供相应的酶。
溶菌酶缓冲液：20mM Tris·Cl(pH8.0)，2mM sodium EDTA，1.2% Triton X-100
使用前，直接加入溶菌酶，配置浓度为20mg/mL。
实验准备
- Buffer ACL和Buffer CL在保存过程可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前加热至56℃溶解。
- 提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入乙醇。
- 水浴锅56℃预热。
抽提步骤(细菌)
- 样品准备(菌液)
  - 革兰氏阴性细菌：
    - 将过夜培养的细菌(大约2×10⁹个细菌)转移到离心管中，10000×g离心30 s，弃上清。
    - 加入180μL Buffer ACL和20μL Proteinase K到样品中，涡旋充分混匀，56℃水浴1h。
    - 加入200μL Buffer CL，涡旋充分混匀。
  - 革兰氏阳性细菌：
    - 将过夜培养的细菌(大约2×10⁹个细菌)转移到离心管中，10000×g离心30 s，弃上清。
    - 加入180μL溶菌酶溶液(20mg/mL溶菌酶，20mM Tris-HCl，pH8.0,2mM EDTA，1.2% Triton X-100，试剂盒未提供)，
      充分混匀，37℃温浴30～60min。
    - 加入200μL Buffer CL和20μL proteinase K。涡旋充分混匀，56℃水浴30min。
      - 水浴过程间歇混匀，促进样品的裂解。
      - 如果需要RNA-free的基因组DNA，加入20μL RNase A (10mg/mL)，涡旋混匀，室温孵育5min后再进行步骤2。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤4-9操作。

六、精子样本

用户自备材料(精子)
准备Buffer X2：
20mM Tris·Cl(pH8.0)，20mM EDTA，200mM NaCl，4% SDS。
使用前，直接加入80mM DTT(终浓度)，12.5μL/ml Proteinase K。
不要使用工业酒精，因为其中含有甲醇或丁酮等其他化合物。
将1M DTT原液分装储存于-20℃。
精子基因组DNA提取不需要用到本试剂盒中的Buffer ACL。
实验准备
如上所述准备Buffer X2。
Buffer CL在保存过程可能会形成沉淀。如果有沉淀，使用前加热至56℃溶解。
提供的CW1 Solution和CW2 Solution为浓缩液。检查是否已正确加入乙醇。
水浴锅56℃预热。
抽提步骤(精子)
- 将100μL精液加入到离心管中，并加入100μL Buffer X2。56℃水浴直到样品溶解(至少1h)。水浴过程间歇混匀，促进样品裂解，或放置于恒温金属浴中。
- 加入200μL Buffer CL到样品中，涡旋充分混匀。然后加入200μL乙醇(96～100%)，再次涡旋充分混匀。
  - 样品、Buffer CL和乙醇应立即混匀并涡旋振荡或吹打充分混匀，形成均一的溶液。处理多个样品时，Buffer CL和乙醇可预混在一起，并一起加入溶液中以节省时间。
  - 加入Buffer CL和乙醇时可能会形成白色沉淀。沉淀对结果无影响。
- 将步骤2的混合液(包括所有沉淀)加入到套在2mL收集管的SD-10吸附柱中。以大于6000×g(8000rpm)的
  离心速度离心1min。倒掉收集管中的液体。
- 根据“一、新鲜或冻存的动物组织”的抽提步骤6-9操作。

吸附步骤中堵塞
- 确保样品在加入到吸附柱前已彻底匀浆。
- 减少样品使用量。根据第三页的建议使用适当量的样品。
- 确保样品裂解完全。裂解时间因组织类型不同而有所不同，通常为1~3h，可裂解过夜。
- 检查Buffer ACL和Buffer CL，如果储存过程形成沉淀，加热至56℃使沉淀溶解。
得率低。
- 将组织样品彻底匀浆。可用液氮或匀浆机处理组织样品。
- 使用适当量的样品。DNA得率取决于样品的类型、大小、年龄和保存方法根据第三页的建议使用适当量的样品。
- 请检查CW1 Solution和CW2 Solution是否已加入乙醇稀释。
- 请严格参照说明书对样品进行洗脱。参考说明书提供的注意事项。
- 避免吸附膜过于干燥。将SD-10吸附柱室温静置3～5min使吸附膜干燥。不要将吸附膜置于65℃。
血液形成血块，溶解产物无法通过吸附柱或得率低。
- 减少血液用量。根据说明书使用适当量的样品。
- 使用EDTA或ACD等抗凝剂收集血液，避免血液结块。
- 从血液样品中提取的DNA含量主要取决于血液中白细胞的数量及血液的保存条件。保存于-80℃的样品DNA得率通常会降低15%。为获得最好的效果，血液4℃保存应小于5天，长期保存应冻存于-80℃。
抑制后续实验酶促反应。
- 来源于CW2 Solution的残留乙醇可抑制后续实验的酶促反应。将吸附柱12000×g离心2min，室温开盖静置2～3min，以彻底去除残留乙醇。
- 残留的盐离子可抑制后续实验的酶促反应。Buffer CW1，CW2应于室温下使用(15～25℃)。
- PCR相关实验时减少基因组DNA模板使用量。100ng模板DNA中一个单拷贝的基因通常在35个PCR循环后可被检测到。
DNA降解。
- 使用新鲜样品。如果是冻存的样品，确保样品是取样后立即冷冻于液氮并合理保存于-70℃的样品。
- 不新鲜的样品常常只提取到降解的DNA。
纯化的DNA其A260/A280比值很高。
- DNA中有RNA污染，进行操作步骤中选做的的RNase处理实验。
DNA中有RNA污染。
- 进行操作步骤中选做的的RNase处理实验。
- 直接将RNase加入到DNA洗脱液中。
DNA保存后发现降解。
- DNA可在2～4℃保存几个星期。如果要长期保存，DNA应保存于-20℃。
- 用CE buffer或TE buffer洗脱DNA，Tris或Tris-EDTA缓冲液具有足够的缓冲能力防止酸解。

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